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2×Taq Plus PCR MasterMix( 含绿染料)

简要描述:

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更新时间:2024-01-12

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公司·百家乐·产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!

货号

·百家乐·产品名称

规格

A-Hc2098

2×Taq Plus PCR MasterMix( 含绿染料)

1ml×5

A-Hc2098

2×Taq Plus PCR MasterMix( 含绿染料)

1ml×50

A-Hc2098

2×Taq Plus PCR MasterMix( 含绿染料)

1ml×100

储存条件:-20℃ 保存。

制品说明:

本·百家乐·产品包含Taq Plus DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液,浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可最大限度的减少人为误差。使用时只需加入DNA模板和引物既可。

本·百家乐·产品使用方便快捷,能避免 PCR 操作过程中的污染,使用时只需取适量2×Taq PCR MasterMix溶液,加入模板和引物,并加入去离子水补足体积,使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀,操作需在冰上进行。

本·百家乐·产品有含染料和不含染料两种。含染料·百家乐·产品中有两种染料|(绿色染料和黄色染料),在电泳时会分开以监测迁移进度。青色的染料在1%的琼脂糖凝胶中与3-5kb DNA片段的迁移率相同。黄色的染料在1%的琼脂糖凝胶中比引物迁移得快(<50bp)。

·百家乐·产品内容:0.05units/μl Taq Plus DNA Polymerase 、4mM MgCl2、0.4mM dNTPs (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)

质量控制:经检测无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余 DNA ;能有效地扩增人基因中的单拷贝基因;室温存放一周,无明显活性改变。

适用范围:

基因检测:本·百家乐·产品不同批次之间误差很小,特别适合大规模基因检测,半定量PCR实验和微量DNA的检测。

DNA扩增和一些有特殊结构的复杂模板和GC含量高(>417443260%),有二级结构等的扩增:DNA片段的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定等。PCR产物带A,纯化后可直接用TA克隆。

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PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?

试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。  这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验:

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:

一、变性:

利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性:

在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。

三、延伸:

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR反应条件优化:

1、变性温度和时间:

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~417443260s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于141744326个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

4、循环数:

其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。

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