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tNOS基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

简要描述:

tNOS基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的相关·百家乐·产品:HPL/PL 人胎盘泌素抗体 规格: 0.1ml
NR1D1/REV-ERB alpha 细胞核受体Rev-Erbα抗体 规格: 0.2ml
Rabbit Anti-Guinea pig IgG/PE PE标记的兔抗豚鼠IgG 规格: 0.1ml
ABCE1 核糖核酸酶L抑制蛋白抗体 规格: 0.2ml

更新时间:2022-02-17

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tNOS基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

PCR实验方法步骤:

方法

1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix (2mM)

4 μl     引物1(10pM)

2 μl     引物2(10pM)

2 μl     Taq酶 (2U/μl)

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)

1 μl      加ddH2O至 50 μl

·百家乐·产品特点:

◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;

◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;

◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;

◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

操作流程:

收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。

特别提示:本公司的所有·百家乐·产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!

·百家乐·产品名称

规格

货号

tNOS基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

48T  0.1PCR管

FS-01H4139

 


操作流程.jpg

 

实时荧光定量PCR:

实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:

1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。

2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。

外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确,重现性定量方法,已得到的*,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。

定量PCR方法:

a、竞争法

选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。

b、内参照法

在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测

使用方法:

一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。

1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液,*用带芯枪头,下同)。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7. 用自选方法纯化样品的 DNA,本·百家乐·产品跟市场上绝大多数核酸纯化·百家乐·产品兼容。

8. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。

三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于PCR 阳性对照。

486-62-4芒柄花;Onin 规格: 20mg

568-72-9丹参IIA 规格: 20mg

15318-45-3甲砜 规格: 100mg

461-58-5胺;纯品型;标准品;有证书 规格: 0.1g

169534-85-4原百部次 规格: 5mg

棕榈甲酯 规格: 25mg

68-26-8A 规格: HPLC≥95%;20mg

干姜对照药材 规格: 1g

4460-86-0细辛醛;2,4,5-Trimethoxy 规格: 20mg

53963-43-2人参皂F1 规格: HPLC≥98%,20mg/支

tNOS基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)SDCCAG8  结肠抗原8抗体 规格: 0.2ml

UBE2J2  泛连接J2抗体 规格: 0.2ml

MAGE-1  黑色瘤相关抗原抗体 规格: 0.1mlphospho-MEF2C(Thr300)  磷化肌细胞增强因子2C抗体 规格: 0.1ml

Destrin 19/ADF  肌动解聚因子19抗体 规格: 0.1ml

GPSM1  G信号调节1抗体 规格: 0.2mlRabbit anti-MG IgG/PE-Cy3  PE-Cy3标记的兔抗爪沙鼠IgG 规格: 0.1ml

CD163/M130  CD163抗体 规格: 0.1ml

SERPINB12  抑制剂B12抗体 规格: 0.2ml

CD8  CD8抗体 规格: 0.1ml

CTBP1  C端结合1抗体 规格: 0.2ml

Tuberin/TSC2  马铃薯球(结节性硬化)抗体 规格: 0.2ml

TFE3  转录因子E3 规格: 0.1ml