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单体亲和素磁珠

简要描述:

单体亲和素磁珠公司正在出售的·百家乐·产品:高转移人肝癌细胞 胆囊收缩8封闭多肽 禽传染性支气管炎病毒荷兰株PCR检测试剂盒 大鼠抗心肌抗体(AMA) 试剂盒 ELISA 白蛋白含量活性比色法检测试剂盒 梨黑斑链格孢 COX4NB蛋白抗体

更新时间:2024-01-12

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商品属性:

·百家乐·产品名称

规格

货号

单体亲和素磁珠

1ml10mg/ml

A-Hc2059

百家乐

亲和素(或链霉亲和素)和生物su之间表现的相互作用,是已知的非共价相互作用最高的一种。亲和素、链霉亲和素、 单体亲和素及其类似物已成为探针研究实验中强大的亲和配体工具,被广泛应用于生化分析、诊断、亲和纯化和药物递送。Monomer Avidin Magnetic Beads是一种高度均匀的超顺磁性微球,表面包裹着高密度的超纯(>97%)亚单位单体亲和素。单体亲和素源自天然四聚体蛋白,它保留了与天然亲和素相同的生物su结合特异性,但其生物su结合亲和力会有显著降低(kD=~10-8 M)。因此,通过使用温和的洗脱条件,例如含有2 mM 生物su的缓冲液,就可以很容易地从单体亲和素中洗脱结合的生物su化分子。本款磁珠经过专门设计、测试和质量控制,可用于免疫沉淀、细胞分选,以及从细胞裂 解液或杂交反应中快速一步捕获生物su化分子,如DNA、RNA、抗体或蛋白质。


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·百家乐·产品特点:

·快捷,简单的一步法高通量操作;无需纯化柱或过滤器,或重复移液、离心等操作

(图1)

·结合能力,在温和的条件下洗脱结合的生物su化分子

·在温和的洗脱条件下纯化生物su化样品

·极小的非特异性结合

·对样本体积要求低,便于自动化操作

·成本低:只有市场同类·百家乐·产品磁珠价格的一半

·磁珠至少可以重复使用5次

缓冲液


·1x PBS Buffer (0.1 M 磷酸钠, 0.15 M 氯化钠; pH 7 ) ·1x Regeneration Buffer (0.1 M Glycine/HCl,pH 2.8) ·1x Blocking/Elution Buffer (2 mM D-生物su溶于 PBS)

磁力分离器(适用于手动操作):根据实验时生物样品的体积,使用者可以选择以下不同型号的磁力分离器: 8 孔磁力架可以容纳 8 个单独的 1.5-2.0 ml 离心管 ; 24

孔磁力架可以容纳 24 个单独的 1.5-2.0 ml 离心管; 4 孔磁力-15 可以容纳 4 个单独的15ml 离心管; 4 孔磁力架-50 可以容纳四个单独的 50 ml 离心管。

操作过程

操作过程中实验体积可根据需要放大或者缩小

提示:在纯化生物su化蛋白质、多肽和其他分子之前。用户应将试剂盒中的所有试剂温度 平衡至室温,并用双蒸馏水配制 1x 工作溶液。

1. 轻轻震动装有磁珠的试剂瓶,直到磁珠悬浮。将 50µl 磁珠转移到新试管中。

提示:客户应根据每个实验粗样品中生物su化分子的数量,根据经验确定最佳的磁珠

使用量。过多的磁珠会导致背景更高;磁珠使用量少会造成产量降低。·百家乐·建议纯化50μg 生物su化分子添加 50μl 悬浮的磁珠。

2. 将试管放在磁力分离器上1 分钟。当磁珠沉淀时,去除上清液。取下试管加入四倍 磁珠体积的d2H2O,充分混合。并将试管再次置于磁力分离器上1 分钟,去除上清 液。

3. 按照步骤2 所述方式,用四倍磁珠体积的1x PBS 缓冲液清洗磁珠。

4. 加入三倍磁珠体积的1xBlocking / Elution Buffer,通过涡旋充分混合,并在室温下培养5 分钟。将试管放在磁力分离器上1 分钟。去除上清液。

5. 加入六倍磁珠体积的1xRegenerationBuffer,通过涡漩充分混合,并将试管放在磁力分离 器上1 分钟。去除上清液。

6. 加入四倍磁珠体积的1x PBS Buffer,并按照步骤2 所述方式清洗磁珠。这些磁珠可以随时使用。

提示:必须立即使用磁珠,否则粘合能力将显著降低。

7. 向磁珠中加入含有生物su化分子的样品,通过移液器吹吸充分混合,并在室温下缓慢旋转培养30-60 分钟。

8. 将试管放在磁力分离器上,保持试管留在分离器上的同时去除上清液。如步骤 2 所示, 用1x PBS 清洗磁珠,直到在280 nm 处洗脱液的吸光度接近背景水平(OD280<0.05)。

9. 加入一倍磁珠体积的Blocking/Elution Buffer,通过移液器吹吸充分混合,并在室温下培养 5-10 分钟,将与磁珠结合的生物su化分子洗脱下来。

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PCR基本步骤及注意事项?

一、实验原理

PCR是体外人工选择性扩增DNA的一种方法,它类似于生物体内DNA的复制。在生物体内DNA复制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而体外PCR反应同样需要类似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工设计的特定序列,实现对特定位置的扩增;PCR Buffer提供一个反应的缓冲环境;反应过程同生物体内一样,DNA双链打开,引物结合模板,延伸形成新链。而这些过程在生物体内靠DNA解旋酶解链,而在体外在通过控制反应温度实现的。如常用94℃变性模板DNA打开双链,在退火温度处引物结合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反复重复此过程即可实现对特定片段DNA的大量扩增。到第三循环开始才产生出和靶DNA区段相同的DNA分子,进一步循环地产生出靶DNA区段的指数加倍。

在扩增后期,由于产物积累,使原来呈指数扩增的反应变成平坦的曲线,产物不再随循环数而明显上升,这称为平台效应。平台期(Plateau)会使原先由于错配而产生的低浓度非特异性产物继续大量扩增,达到较高水平。因此,应适当调节循环次数,在平台期前结束反应, 减少非特异性产物。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。

二、主要的成分

1.模板可以是多种形式,主要包括基因组DNA、质粒DNA、携带病毒的基因组DNA、PCR产物,cDNA等,但不能为RNA。对于不同类型的模板,其主要不同在于预变性的时间以及模板的量。一般对于大的基因组DNA预变性时间10min足够,质粒DNA2min、携带病毒的基因组DNA预变性2min、PCR产物预变性2min即可。

注意cDNA为单链DNA,但仍可做PCR的模板,只不过在第一轮循环时只有一个引物结合,合成另一条链。从第二轮开始,两个引物均与特异位点结合,从而实现了与常规PCR的接轨。而同作为单链的RNA却不能进行PCR扩增,原因就在于实现PCR反应的是DNA聚合酶,只能特意识别DNA链。

2.对于模版的量来说,一般25ul体系DNA的质量为50—100ng。对于基因组DNA由于其结构比较复杂,提取的浓度也往往比较大,为防止浓度过大对PCR造成影响,故需对提取的DNA进行梯度稀释。否则浓度过高则可能会引起非特异性扩增。对于质粒及PCR产物由于其结构简单,且提取浓度一般较低,则无需稀释。

PCR实验中应该注意的问题有哪些?

没有ct值

检测结果遇到没有Ct值情况,排查是否有以下问题:

1、循环数不够(一般不超过45循环,不仅背景值提高,定量也不准);

2、PCR程序设置错误,检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集,TaqMan法则一般在退火结束时或延伸时采集信号,另外荧光采集是否选中;

3、引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测引物和探针是否降解;

4、模板量可能降解或上样量不足(不超过500ng,根据试剂盒说明书即可), 对未知浓度的样本应从系列稀释样本的最高浓度做起;如果发生模板降解,应考虑样本准备中杂质的引入及反复冻融的情况,建议将模板样本小量分装储备,避免反复冻融;

5、引物探针是否合适(尤其是引物跨越内含子,以确保扩增基因组DNA;上下游引物Tm值超过4℃以上也会影响扩增)。

ct值过晚

在相对定量中, Ct值一般控制在15—25之间比较好,如果在绝对定量中, 对低拷贝数的样品,Ct值会增大, 但是一般不宜超过40循环, 否则定量不准确。

因此,判断Ct值出现过晚是否属于非正常情况, 需要根据具体实验设计和目的进行。

1、扩增效率低。引物之间或者引物和探针的比例不合适, 需要进行优化;引物或探针设计不合理, 需要重新设计;

2、PCR程序不合适, 改用三步法进行反应, 或者优化退火/延伸温度, 可以适当降低退火温度; 退火/延伸时间短(可以在推荐的时间条件下延长10s);

3、MgCl2浓度不合适,增加镁离子浓度等。PCR各种反应成分的降解或加样量的不足;

4、PCR产物太长。PCR产物设计超过500bp;

5、模板中存在抑制物。用高纯度模板进行PCR检测或将模板进行稀释。

公司正在出售的·百家乐·产品:

细小病毒B19 染料法荧光定量PCR试剂盒

登革热ELISA试剂盒 IgG免费代测试剂

弧菌O139型染料法荧光定量PCR试剂盒

草豆蔻染料法PCR鉴定试剂盒

补体片段3dELISA试剂盒 C3d免费代测试剂

人副流感病毒2PCR检测试剂盒供应

乙型肝炎病毒阿德福韦耐药变异(RTRT位点)PCR测定试剂盒

CopineⅣ蛋白ELISA试剂盒

灭鲑气单胞菌PCR检测试剂盒

寨卡病毒PCR检测试剂盒

布皮质1ELISA试剂盒

绵羊源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

鲁氏耶尔森菌染料法荧光定量PCR试剂盒

促肾上腺皮质激样中叶肽ELISA试剂盒

戈氏放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒

球孢白僵菌染料法荧光定量PCR试剂盒

单酰甘油-O-酰基转移1ELISA试剂盒

猪蓝耳病病毒(高致病性)PCR检测试剂盒

犬巴贝斯虫PCR检测试剂盒

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牛疱疹乳头炎病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

流行性腮腺炎病毒PCR检测试剂盒

蛋白激活复合体亚基2ELISA试剂盒

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淀粉αELISA试剂盒

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多免疫球蛋白受体ELISA试剂盒

绵羊源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

空肠弯曲杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

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α肌动蛋白(αActin)elisa试剂盒

山楂染料法PCR鉴定试剂盒

节瘤拟杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

人泛结合E2D2UBC4/5的同源物,酵母)(UBE2D2)ELISA检测试剂盒

鲑鱼立克次氏体探针法荧光定量PCR试剂盒

问号钩端螺旋体探针法荧光定量PCR试剂盒

Q热科克斯体1(Q fever)抗体(IgG)ELISA试剂盒

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