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TRIzol Reagent

简要描述:

TRIzol Reagent公司正在出售的·百家乐·产品:小鼠皮肤细胞 “冷"蛋白TRPM8封闭多肽 纤维单胞菌通用PCR检测试剂盒 大鼠绒毛膜促性腺激β(β-CG)ELISA试剂盒 莽草脱氢(SD)活性比色法检测试剂盒 喜盐芽胞杆菌 心肌病相关蛋白2抗体

更新时间:2024-01-12

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货号

·百家乐·产品名称

规格

A-PJ1067

TRIzol Reagent

100 ml

是一种可提取动植物样品中RNA 的制品。样品在 TRIzol Reagent 中能够充分被裂解,在样品匀浆或裂解过程中,它可保持 RNA 的完整性,同时裂解细胞,溶解细胞内含物。TRIzol Reagent 具有很强的广谱性,可以适用于各种样品的总 RNA 提取,提取过程方便快速,整个操作在一小时内便可以完成。该试剂可用于小量样品(50-100 mg 组织、1x106 细胞)也适用于大量样品(≥1g组织、>107 细胞)。对人、动物、植物组织、细菌均适用,可同时处理大量不同样品,整个提取过程在一小时内即可完成。分离的总RNA蛋白质和 DNA污染极低,可用于NorthernBlot、反转录、ployA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和基因克隆。
储存:2-8℃避光保存,可保存 2 年。
注意:该试剂含有强变性剂,请勿直接于皮肤接触或吞咽,若接触到皮肤或眼睛请尽快到医院处理。实验时务必穿实验服,戴手套。
操作方法
自备试剂:氯仿,异丙醇,70%乙醇(DEPC 水配置),RnaseFree H2O。
Ⅰ 实验前准备:RNA 制备的关键是要抑制细胞中的 RNA 分解酶和防止所用器具及试剂中的 RNA 分解酶的污染。因此,在实验中必须采取以下措施:戴一次性干净手套;使用 RNA 操作专用实验台;在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的 RNA 分解酶的污染。
注意事项:
1. 尽量使用一次性塑料器皿,若用玻璃器皿,应在使用前用0.1%DEPC 水溶液在 37℃处理 12h,然后在 120℃高压灭30min 以除去残留的 DEPC。
2. 用于 RNA 实验的试剂,须使用干热灭菌(180℃,60min)或使用上述方法进行 DEPC 水处理灭菌后的玻璃容器盛装(也可以使用 RNA 实验用的一次性塑料容器),使用的无菌水须用 0.1%的 DEPC处理后再进行高温高压灭菌。
3. RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用,避免混用后交叉污染。
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PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?

试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。  这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验:

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:

一、变性:

利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性:

在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。

三、延伸:

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR反应条件优化:

1、变性温度和时间:

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

4、循环数:

其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。

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蜡样杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

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枪状肝吸虫染料法荧光定量PCR试剂盒

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荞麦源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒

马秋博病毒PCR检测试剂盒

恶性脑肿瘤缺失蛋白1ELISA试剂盒

镰刀菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒

马疱疹病毒2型探针法荧光定量PCR试剂盒

二肽3ELISA试剂盒

牛型放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒

气管比翼线虫探针法荧光定量PCR试剂盒

防御β119ELISA试剂盒

马内菲青霉探针法荧光定量PCR试剂盒

链霉菌通用PCR检测试剂盒直销

人调宁蛋白-1(CNN1)ELISA检测试剂盒

铅黄肠球菌探针法荧光定量PCR试剂盒

牛腺病毒(4-8型)通用探针法荧光定量PCR试剂盒

β-促脂(β-LPH)试剂盒elisa

蓝氏贾第鞭毛虫B型染料法荧光定量PCR试剂盒

铅黄肠球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

TRIzol Reagent人布鲁氏菌抗体IgG(Brucella Ab IgG)ELISA试剂盒

同禽腺病毒型鹌鹑支气管炎病毒PCR检测试剂盒

小鼠白血病病毒PCR检测试剂盒

β2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA检测试剂盒

鸭乙型肝炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

鱼类神经坏死病毒(VNN)核检测试剂盒

人成纤维细胞生长因子8(FGF8)检测试剂盒elisa

侵肺巴斯德菌探针法荧光定量PCR试剂盒