·百家乐·产品列表PRODUCTS LIST

5×Q-Solution

简要描述:

5×Q-Solution公司正在出售的·百家乐·产品:鼠胚成纤维包装细胞 磷化脊髓小脑失调症蛋白1封闭多肽 犬副流感病毒PCR检测试剂盒 大鼠热休克蛋白70(HSP-70)ELISA检测试剂盒 磷脂D(PLD)活性比色法检测试剂盒 栖海胆菌 11号染色体开放阅读框74抗体

更新时间:2024-01-12

分享到: 1
在线留言
5×Q-Solution

公司·百家乐·产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!

货号

·百家乐·产品名称

规格

A-PJ1061

5×Q-Solution

1ml

6.png


5.png

PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?

试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。  这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验:

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:

一、变性:

利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性:

在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。

三、延伸:

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR反应条件优化:

1、变性温度和时间:

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

4、循环数:

其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。

公司正在出售的·百家乐·产品:

神经肉孢子虫染料法荧光定量PCR试剂盒

胞浆免疫球蛋白ELISA试剂盒 CIg免费代测试剂

睡眠嗜血杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

传染性脓疱皮炎病毒PCR检测试剂盒价格

单核细胞巨噬细胞分化关联蛋白ELISA试剂盒 MMA免费代测试剂

青蟹双顺反子病毒PCR检测试剂盒直销

鼻疽伯克霍尔德菌(BM)核检测试剂盒

细胞周期IELISA试剂盒

马生殖泰勒氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒

呼吸道合胞病毒APCR检测试剂盒

弹性蛋白微原纤维界面因子1ELISA试剂盒

马胃葡萄球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

马秋博病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

低氧诱导因子2ELISA试剂盒

索氏梭状杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

侵入性丝囊霉菌(溃疡综合症病原)染料法荧光定量PCR试剂盒

丁型肝炎病毒抗体ELISA试剂盒

犬细小病毒(CPV)核检测试剂盒

禽阿尔法疱疹病毒2型探针法荧光定量PCR试剂盒

多巴胺受体D5ELISA试剂盒

芡实探针法PCR鉴定试剂盒

马疱疹病毒4型探针法荧光定量PCR试剂盒

多萜醇磷-N-乙酰氨基葡萄糖磷转移1

ELISA试剂盒

链球菌属通用PCR试剂盒

马毛癣菌探针法荧光定量PCR试剂盒

二氢叶还原ELISA试剂盒

牛腺病毒(4-8型)通用PCR试剂盒

枪状肝吸虫探针法荧光定量PCR试剂盒

防御β112ELISA试剂盒

马疱疹病毒型PCR检测试剂盒

莲子染料法PCR鉴定试剂盒

人动力蛋白轻链1,细胞质(DYNLL1/DLC1/DNCL1/DNCLC1/HDLC1)ELISA检测试剂盒

气单胞菌通用PCR检测试剂盒

牛眼莫拉氏菌PCR检测试剂盒供应

人孤腓肽(OFQ/N)试剂盒elisa

肠贾第虫染料法荧光定量PCR试剂盒

阴沟肠杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

5×Q-Solution人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)ELISA试剂盒

同猪疱疹病毒型伪狂犬病病毒PCR检测试剂盒

绵羊莫拉菌PCR检测试剂盒

β,β胡萝卜9',10'加氧(BCO2)试剂盒ELISA

人肤蝇探针法荧光定量PCR试剂盒

鲤春病毒(SVCV)核检测试剂盒

人成纤维细胞生长因子10(FGF10)检测试剂盒elisa

枪状肝吸虫探针法荧光定量PCR试剂盒