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Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer

简要描述:

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更新时间:2024-050478408-504784082

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规格

A-PJ50478408095

Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer

5047840800ml

对目的蛋白进行检测分析时,总蛋白的提取至关重要,如蛋白提取不好会导致后续试验的不理想甚至失败,如:信号极弱或无杂交信号、背景高、非特异性条带多等.根据目标蛋白的类型和实验应用种类来选择合适的RIPA裂解液,才能程度地保证后续实验的成功。

Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer对细胞有一定的裂解能力,能获得较多的胞浆蛋白,而对细胞核的裂解能力有限,不能裂解细胞核,因此获得的总蛋白适用于IP或CO-IP实验;而WB Super RIPA Lysis Buffer对动物组织和细胞的裂解能力强,它可以裂解细胞核和线粒体,并可提取到更多的膜蛋白,从而可获得更多的总蛋白。因其强的裂解能力,使得大量的基因组DNA从细胞核中释放出来,使蛋白变的十分粘稠,使用Benzonase核酸酶消化可有效解决。经RIPA裂解液获得得蛋白可用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度;使用Bradford法测定由本裂解液裂解所得到样品的蛋白浓度会稍有误差。

百家乐超强RIPA裂解液
50478408.可很好的释放胞浆蛋白,部分释放膜蛋白和核蛋白。
2.经Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer,核蛋白与DNA还紧密
结合在一起,离心后会造成核蛋白的丢失。
3.对于膜蛋白,Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer的破坏力
小,不能使膜蛋白与膜充分分离,故离心后造成膜蛋白
的丢失。
4.在提取蛋白过程中,基因组DNA释放使得蛋白提取液
变的十分粘稠,影响蛋白电泳和杂交效果。

50478408.可以很好的裂解细胞膜及细胞核,从而更好的释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白。
2.对于核蛋白,经WB Super RIPA Lysis Buffer裂解后,核蛋白与粘稠的基因组DNA分离,离心后核蛋白存在于上清中,核蛋白的捕获率高达90%。
3.对于膜蛋白,WB Super RIPA Lysis Buffer可大程度的破坏细胞膜和变性蛋白,使蛋白与膜分离,防止蛋白与膜复合物在离心后沉淀,从而防止蛋白丢失。
4.在提取蛋白过程中,基因组DNA释放使得蛋白提取液变的十分粘稠,使用Benzonase核酸酶消化可有效解决。

储存

置于室温阴凉处,可保存2年。

实例

超强RIPA裂解液
Fig.用WB Super RIPA Lysis Buffer和Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer分别提取核蛋白PPARγ和膜蛋白PLD-50478408,上样量分别为40ug和504784080ug总蛋白,ECL发光液显色。A/C泳道为WB Super RIPA Lysis Buffer,B/D泳道为Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer。由此图比较分析表明WB Super RIPA Lysis Buffer能更充分的释放核蛋白和膜蛋白,从而获得更强的信号。

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PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?

试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。  这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验:

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:

一、变性:

利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间50478408-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性:

在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间50478408-2分钟。

三、延伸:

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成50478408000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约504784080-504784085秒。

PCR反应条件优化:

50478408、变性温度和时间:

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于504784086个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于50478408kb, 50478408min足够;大于50478408kb需加长延伸时间。Taq酶可根据50478408kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

4、循环数:

其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到5047840800%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。

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