·百家乐·产品列表PRODUCTS LIST

Exonuclease T

简要描述:

Exonuclease T公司正在出售的·百家乐·产品:人胚肺成纤维样细胞(男) 蛋白激MST1/2封闭多肽 鲤疱疹病毒型PCR检测试剂盒 大鼠铁蛋白(FE)ELISA试剂盒 土壤β木糖苷 (SβXYS)活性比色法检测试剂盒 柠檬黄色农球菌 连接蛋白JPH3抗体

更新时间:2024-01-14

分享到: 1
在线留言
百家乐

公司·百家乐·产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!

货号

·百家乐·产品名称

规格

A-PJ1123

Exonuclease T

250U

A-PJ1123

Exonuclease T

2500U

百家乐

核酸外切酶 T(Exo T),又称为 RNase T,是一种单链 RNA 或 DNA 特异性核酸酶,该酶需要游离的3′ 末端,以 3′-5′ 方向去除核苷酸。核酸外切酶 T 可用于将含有 3′ 突出末端的 RNA 或 DNA 生成平末端。
本·百家乐·产品是通过重组表达 Exonuclease T 基因而得的高纯度蛋白,无核酸内切酶和其他外切酶的污染。

活性定义:在 100 μl 反应体系中,25℃ 条件下,30 分钟内能从 1 nmol [3H]-标记的聚胸腺嘧啶核苷催化产生0.1 nmol 的可溶于TCA的 DNA 所需要的酶量定义为一个活性单位。
1X Exonuclease T Buffer
50mM KAc,20mM Tris-Ac,10mM Mg(Ac)2,1mM DTT(pH 7.9)
热失活:417443265°C,20min。
酶储存液:10 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol, 200 μg/ml BSA, pH 7.5。
储存:置于-20°C 可保存 2 年,避免反复冻融。
注意事项
核酸外切酶 T 对 RNA 和 DNA 具有不同的活性。对于RNA,在标准反应条件下,通过凝胶电泳检测,1 单位核酸外切酶 T 可以消化 1.0 pmol 的 rA20。5.png

PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?

试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。  这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验:

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:

一、变性:

利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性:

在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。

三、延伸:

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR反应条件优化:

1、变性温度和时间:

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~417443260s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于141744326个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

4、循环数:

其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。

公司正在出售的·百家乐·产品:

人免疫缺陷病毒1MK型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

β淀粉样前体蛋白ELISA试剂盒 β-APP免费代测试剂

人腺病毒D94型探针法荧光定量PCR试剂盒

长鼻分咽线虫PCR检测试剂盒直销

蛋白磷1调控/抑制因子亚基1AELISA试剂盒 PPP1R1A免费代测试剂

牛捻转胃虫PCR检测试剂盒价格

羊源性成分(Ovine)核检测试剂盒

细胞色P450家族成员24A1ELISA试剂盒

马痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

淋球菌PCR检测试剂盒

低密度脂蛋白受体相关蛋白4ELISA试剂盒

马动脉炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

毛细线虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒

多巴胺β羟化ELISA试剂盒

脑膜炎奈瑟菌血清群XPCR检测试剂盒(荧光PCR法)

彭氏变形菌染料法荧光定量PCR试剂盒

多萜醇磷-N-乙酰氨基葡萄糖磷转移1ELISA试剂盒

鼠疫杆菌(YP)核检测试剂盒

彭氏变形菌探针法荧光定量PCR试剂盒

二氢叶还原ELISA试剂盒

禽副粘病毒3型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

毛霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒

泛分解ELISA试剂盒

蜡状杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

猫衣原体探针法荧光定量PCR试剂盒

防御β115ELISA试剂盒

派琴虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒

诺如病毒G1型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

分拣连接蛋白41744326ELISA试剂盒

麻疹病毒(MVPCR检测试剂盒(荧光-PCR法)

流行性造血器官坏死病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

人脆性组氨三联体(FHIT)ELISA试剂盒

禽结核分枝杆菌PCR检测试剂盒

捻转毛细线虫探针法荧光定量PCR试剂盒

人吡啶酚(PYD)检测试剂盒elisa

禽嗜血杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

绵羊附红细胞体(绵羊嗜血支原体)探针法荧光定量PCR试剂盒

Exonuclease T人白介32(IL-32)试剂盒ELISA

裂谷热病毒PCR检测试剂盒

斯氏分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

γ干扰(IFN-γ)抗体试剂盒ELISA

内阿米巴通用探针法荧光定量PCR试剂盒

鲨鱼源性成分(Shark)核检测试剂盒

人大疱性类天疱疮抗体(BP)ELISA检测试剂盒

病毒H9亚型PCR检测试剂盒