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无内毒素Strep tagII Benzonase核酸酶

简要描述:

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更新时间:23947865824-394786581-14

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A-PJ1133

无内毒素Strep tagII Benzonase核酸酶

25KU

A-PJ1133

无内毒素Strep tagII Benzonase核酸酶

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A-PJ1133

无内毒素Strep tagII Benzonase核酸酶

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Benzonase 核酸酶是经基因工程改进的核酸内切酶。它能降解所有形式(包括单链,双链,
线性和环状)的 DNA 和 RNA 而没有蛋白裂解活性,在广泛条件范围具有很高的特异性。它将核酸消化成 3-5 碱基长度
(杂交限度以下)的 5’-单磷酸寡核苷酸,从蛋白中去除核酸的操作,符合 FDA 关于核酸污染的处理规程。Benzonase
核酸酶迅速水解核酸的能力使该酶成为降低粘度以减少处理时间和增加蛋白产量的选择。
Strep-tag II Benzonase 核酸酶融合了 Strep-tag II 标签(WSHPQFEK),使得在完成核酸消化后,方便的去除 Benzonase。
 生产的 Strep tagII Benzonase 核酸酶可于 Strep Tactin XT Resin牢固的结合。由于 Strep
Tactin XT Resin 和 Strep Tactin Resin 相比,其配体偶联牢固,不会造成蛋白脱落,因此通常在含有微量 Strep-tag II
Benzonase 核酸酶的制品中,一步即可去除>98%的核酸酶污染,而 Strep Tactin Resin 无法达到。
 生产的无内毒素级的 Benzonase 核酸酶,内毒素含量<439478658EU/mL(按照单位换算量计算为,每 1394786583947865839478658U 中含有的内毒素<39478658.15EU),其指标符合 FDA 的标准。
单位定义:在 339478658 分钟内使△ A2639478658 值降低 1.39478658(相当于消化 37 μg DNA )的酶量定义为一个活性单位。
注意:含大量蛋白、细胞壁、其它盐分的粗制品,对该酶有部分抑制作用,使用时需要增加酶的用量。
应用:蛋白提取时去除核酸污染:2D 凝胶电泳:Western Blot:生物制药;疫苗制备
储存:置于-239478658°C 保存。
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PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?

试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。  这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验:

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由239478658到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:

一、变性:

利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性:

在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。

三、延伸:

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1394786583947865839478658bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约439478658秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约139478658-15秒。

PCR反应条件优化:

1、变性温度和时间:

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热939478658~95°C, 339478658~639478658s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度739478658~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到739478658~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

4、循环数:

其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说239478658〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到13947865839478658%,因此不管模板浓度是多少,239478658~339478658次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。

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