·百家乐·产品列表PRODUCTS LIST

首页>·百家乐·产品中心>PCR相关试剂>提取试剂盒>miRNA加尾染料法荧光定量PCR试剂盒

miRNA加尾染料法荧光定量PCR试剂盒

简要描述:

miRNA加尾染料法荧光定量PCR试剂盒公司正在出售的·百家乐·产品:人黑色瘤耐细胞株 干细胞生长因子封闭多肽 猫杯状病毒PCR检测试剂盒 大鼠血管性血友病因子/瑞斯托辅因子(VWF)试剂盒 ELISA 线粒体呼吸链复合体Ⅴ/ATP合/三磷腺苷合活性比色法检测试剂盒 凝结芽胞杆菌 锌指蛋白744抗体

更新时间:2024-01-15

分享到: 1
在线留言
百家乐

公司·百家乐·产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!

货号

·百家乐·产品名称

规格

A-Tq3021

miRNA加尾染料法荧光定量PCR试剂盒

200反应

A-Tq3021

miRNA加尾染料法荧光定量PCR试剂盒

300反应

A-Tq3021

miRNA加尾染料法荧光定量PCR试剂盒

400反应

百家乐



65.jpg


PCR基本步骤及注意事项?

一、实验原理

PCR是体外人工选择性扩增DNA的一种方法,它类似于生物体内DNA的复制。在生物体内DNA复制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而体外PCR反应同样需要类似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工设计的特定序列,实现对特定位置的扩增;PCR Buffer提供一个反应的缓冲环境;反应过程同生物体内一样,DNA双链打开,引物结合模板,延伸形成新链。而这些过程在生物体内靠DNA解旋酶解链,而在体外在通过控制反应温度实现的。如常用94℃变性模板DNA打开双链,在退火温度处引物结合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反复重复此过程即可实现对特定片段DNA的大量扩增。到第三循环开始才产生出和靶DNA区段相同的DNA分子,进一步循环地产生出靶DNA区段的指数加倍。

在扩增后期,由于产物积累,使原来呈指数扩增的反应变成平坦的曲线,产物不再随循环数而明显上升,这称为平台效应。平台期(Plateau)会使原先由于错配而产生的低浓度非特异性产物继续大量扩增,达到较高水平。因此,应适当调节循环次数,在平台期前结束反应, 减少非特异性产物。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。

二、主要的成分

1.模板可以是多种形式,主要包括基因组DNA、质粒DNA、携带病毒的基因组DNA、PCR产物,cDNA等,但不能为RNA。对于不同类型的模板,其主要不同在于预变性的时间以及模板的量。一般对于大的基因组DNA预变性时间10min足够,质粒DNA2min、携带病毒的基因组DNA预变性2min、PCR产物预变性2min即可。

注意cDNA为单链DNA,但仍可做PCR的模板,只不过在第一轮循环时只有一个引物结合,合成另一条链。从第二轮开始,两个引物均与特异位点结合,从而实现了与常规PCR的接轨。而同作为单链的RNA却不能进行PCR扩增,原因就在于实现PCR反应的是DNA聚合酶,只能特意识别DNA链。

2.对于模版的量来说,一般25ul体系DNA的质量为50—100ng。对于基因组DNA由于其结构比较复杂,提取的浓度也往往比较大,为防止浓度过大对PCR造成影响,故需对提取的DNA进行梯度稀释。否则浓度过高则可能会引起非特异性扩增。对于质粒及PCR产物由于其结构简单,且提取浓度一般较低,则无需稀释。

67.jpgPCR实验中应该注意的问题有哪些?


没有ct值

检测结果遇到没有Ct值情况,排查是否有以下问题:

1、循环数不够(一般不超过45循环,不仅背景值提高,定量也不准);

2、PCR程序设置错误,检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集,TaqMan法则一般在退火结束时或延伸时采集信号,另外荧光采集是否选中;

3、引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测引物和探针是否降解;

4、模板量可能降解或上样量不足(不超过500ng,根据试剂盒说明书即可), 对未知浓度的样本应从系列稀释样本的最高浓度做起;如果发生模板降解,应考虑样本准备中杂质的引入及反复冻融的情况,建议将模板样本小量分装储备,避免反复冻融;

5、引物探针是否合适(尤其是引物跨越内含子,以确保扩增基因组DNA;上下游引物Tm值超过4℃以上也会影响扩增)。

ct值过晚

在相对定量中, Ct值一般控制在15—25之间比较好,如果在绝对定量中, 对低拷贝数的样品,Ct值会增大, 但是一般不宜超过40循环, 否则定量不准确。

因此,判断Ct值出现过晚是否属于非正常情况, 需要根据具体实验设计和目的进行。

1、扩增效率低。引物之间或者引物和探针的比例不合适, 需要进行优化;引物或探针设计不合理, 需要重新设计;

2、PCR程序不合适, 改用三步法进行反应, 或者优化退火/延伸温度, 可以适当降低退火温度; 退火/延伸时间短(可以在推荐的时间条件下延长10s);

3、MgCl2浓度不合适,增加镁离子浓度等。PCR各种反应成分的降解或加样量的不足;

4、PCR产物太长。PCR产物设计超过500bp;

5、模板中存在抑制物。用高纯度模板进行PCR检测或将模板进行稀释。

公司正在出售的·百家乐·产品:

轮状病毒E群染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

Rho关联含卷曲螺旋蛋白激2ELISA试剂盒 Rock-2免费代测试剂

人腺病毒D28型探针法荧光定量PCR试剂盒

马传染性贫血病毒PCR检测试剂盒说明书

端粒重复结合因子1ELISA试剂盒 TERF1免费代测试剂

水貂病毒性肠炎病毒PCR检测试剂盒价格

小反刍兽疫通用型/疫苗株/野毒株(PPR-U/ PPR-V/ PPR-W)三重核检测试剂盒

防御β131ELISA试剂盒

流感嗜血杆菌PCR检测试剂盒

禽传染性支气管炎病毒PCR检测试剂盒

多巴色异构ELISA试剂盒

六种致泻大肠杆菌六重探针法荧光定量PCR试剂盒(无)

莫佩亚病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

二肽2ELISA试剂盒

博兹曼荧光杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

牛莫拉氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒

泛特异性肽8ELISA试剂盒

登革热病毒1(DFV-I)核检测试剂盒

牛诺如病毒PCR检测试剂盒

防御β125ELISA试剂盒

犬巴贝斯虫染料法荧光定量PCR试剂盒

莫氏立克次体PCR检测试剂盒

肺癌标志物DR-70ELISA试剂盒

克罗诺杆菌通用PCR检测试剂盒说明书

莫氏巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒

分泌粒蛋白ⅤELISA试剂盒

禽白血病病毒D亚群探针法荧光定量RT-PCR试剂盒,停

牛莫拉氏菌PCR检测试剂盒

钙联接蛋白ELISA试剂盒

淋病奈瑟菌PCR检测试剂盒

麻疹病毒核检测试剂盒

人臂板蛋白3A(Sema 3A)检测试剂盒elisa

禽腺病毒PCR检测试剂盒直销

莫氏立克次氏体PCR检测试剂盒

人血浆抗凝蛋白S(PS)试剂盒ELISA

乙型肝炎病毒H型染料法荧光定量PCR试剂盒

羊阔盘吸虫探针法荧光定量PCR试剂盒

miRNA加尾染料法荧光定量PCR试剂盒β2整合(ITG β2/CD11+CD18)ELISA试剂盒

马疥螨PCR检测试剂盒

脑膜炎奈瑟菌PCR检测试剂盒

人白介23受体(IL-23R)ELISA检测试剂盒

茄病镰刀菌探针法荧光定量PCR试剂盒

化脓放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒

人蛋白水解诱导因子/皮离蛋白(PIF/DCD)ELISA试剂盒

犬副流感病毒PCR检测试剂盒