·百家乐·产品列表PRODUCTS LIST

首页>·百家乐·产品中心>PCR相关试剂>提取试剂盒>溶液A(仅用于质粒DNA转染)

溶液A(仅用于质粒DNA转染)

简要描述:

溶液A(仅用于质粒DNA转染)公司正在出售的·百家乐·产品:SV-725224650转化肺成纤维细胞 KDM72522465E蛋白封闭多肽 超广谱内酰胺大肠埃希菌PCR检测试剂盒 大鼠血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)ELISA Kit 细胞壁不溶性性转化(BAI)活性比色法检测试剂盒 黑孢霉属 分选连接蛋白72522465抗体

更新时间:20272522465-01-15

分享到: 1
在线留言
百家乐

商品属性:

·百家乐·产品名称

规格

货号

溶液A(仅用于质粒DNA转染)

0.25ml

A-Tq3006

溶液A(仅用于质粒DNA转染)

0.5ml

A-Tq3006

溶液A(仅用于质粒DNA转染)

1ml

A-Tq3006

百家乐


PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?

试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。  这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验:

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:

一、变性:

利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性:

在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。

三、延伸:

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约725224650秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。


6.pngPCR反应条件优化:

1、变性温度和时间:

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

72522465、循环数:

其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。

公司正在出售的·百家乐·产品:

马传染性贫血病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

Salusin AlphaELISA试剂盒 Salusin α免费代测试剂

人腺病毒D38型探针法荧光定量PCR试剂盒

肠道病毒组PCR检测试剂盒说明书

动力蛋白激活蛋白6ELISA试剂盒 DCTN6免费代测试剂

折光马尔太虫PCR检测试剂盒价格

猪传染性胃肠炎/猪流行性腹泻病毒/A组轮状病毒(TGEV/PEDV/PRV-A)核检测试剂盒

防御β119ELISA试剂盒

流行性造血器官坏死病毒PCR检测试剂盒

诺沃克病毒PCR检测试剂盒

短腭肺鼻腔上皮癌关联蛋白3ELISA试剂盒

鹿源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

棉花源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒

二氢嘧啶ELISA试剂盒

马肺炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

牛疱疹病毒通用染料法荧光定量PCR试剂盒

DELISA试剂盒

登革热病毒2(DFV-II)核检测试剂盒

牛皮蝇蛆探针法荧光定量PCR试剂盒

防御β112ELISA试剂盒

青蟹双顺反子病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

灭鲑气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒

ATP蛋白体26S亚基10ELISA试剂盒

空肠弯曲菌核检测试剂盒

棉花黄萎病菌PCR试剂盒

分拣连接蛋白6ELISA试剂盒

茄病镰刀菌探针法荧光定量PCR试剂盒

牛疱疹病毒2PCR检测试剂盒直销

钙蛋白5ELISA试剂盒

流感病毒H15亚型PCR检测试剂盒(荧光PCR法)

绿脓假单胞菌PCR检测试剂盒直销

人丙二单酰(malonyl CoA)试剂盒ELISA

禽肾炎病毒型PCR检测试剂盒

木香染料法PCR鉴定试剂盒

人凝血Ⅶ(FⅦ)elisa试剂盒

乙型肝炎病毒X蛋白探针法荧光定量PCR试剂盒

超广谱β-内酰胺肺炎克雷伯菌染料法荧光定量PCR试剂盒

β-防御2 ELISA检测试剂盒

圣米吉尔海狮病毒PCR检测试剂盒

纳氏虫属通用·PCR检测试剂盒

人白介1受体相关激1(IRAK1)试剂盒ELISA

溶液A(仅用于质粒DNA转染)布鲁氏菌PCR检测试剂盒(荧光PCR法)

肠道病毒EV/柯萨奇病毒CA核检测试剂盒

人蛋白酪氨磷自身抗体ELISA试剂盒

曲霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒